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miércoles, 21 de diciembre de 2016

Nueva trasncriptasa reversa UtraScript

10°C más termoestable que la MMLV wild type

La transcriptasa reversa UltraScript  ha sido diseñada para ser más termoestable y eficiente incluso con los RNAs más difíciles. Es 10ºC más termoestable que la versión wild type de MMLV. La temperatura de reacción se puede incrementar hasta 55ºC proporcionando una mayor especificidad, mayor cantidad de cDNA y un rendimiento excepcional sin importar la estrategia de cebador de primers que emplees.

 Enzima Termoestable

  • MMLV modificada. Más termoestable de 45ºC a 55ºC.
  • Proporciona mayor especificidad y más eficiente en la transctipción de RNAs con regiones que poseen un alto contenido en estructuras secundarias.
  • Además incluye un avanzado inhibidor de RNasas para prevenir la degradación del RNA por las RNAsas presentes en la muestra    
    Formato Flexible
  • Se suministra con un buffer 5x que contiene Mg, dNTPs, estabilizadores y  potenciadores. 
  • Optimizado para proporcionar altos rendimientos de cDNA a partir de cantidades tan pequeñas de RNA como 4pg.
  • Ofrece un rendimiento excepcional con primers específicos de genes, oligo-dT y hexámeros aleatorios.

Múltiples aplicaciones 

  • Produce cDNA de alta calidad para análisis de PCR, clonaje, preparación de librerías para NGS.
  • Ideal para tránscritos de bajo número de copias, dianas virales del RNA y dianas de miRNA.

Proporciona síntesis eficiente a partir de RNA total o poly/A)+RNA

Figura 1. Enzima termoestable hasta 55°C 

La termoestabilidad de la transcriptase reversa UltraScript se midió utilizando el ensayo fluorescente Sypro Orange. La proteína se incuba con el agente de tinción Sypro Orange y se fue incrementando gradualmente la temperatura. La intensidad de fluorescencia aumenta a medida que la proteína se desnaturaliza y la temperatura de melting es la temperatura en la que el 50% de la proteína se encuentra desnaturalizada. La curva DSF muestra en morado la UltraScript Reverse Transcriptase y en negro muestra la versión wild type de MMLV a una concentración de 0.1 mg/ml. El ensayo muestra como la UltraScript se desnaturaliza a 54.9±0.3°C, que es 9.3ºC más que la enzima wild type. Esto indica que es más termoestable y es más probable que permanezca activa durante la reacción.

Figura 2. Generación de cDNA con alto rendimiento

El cDNA fue creado a partir de 100ng de RNA total de hígado de ratón usando la UltraScript Reverse Transcriptase, en morado y usando la enzima de un competidor en azul. Se añadieron como primers 5μM oligo-dT(18) y 5μM de hexameros aleatorios. La reacción se incubó durante 10 minutos a 42ºC. El cDNA resultante fue cuantificado utilizando el mix qPCRBIO SyGreen. La UltraScript Reverse Transcriptase de PCR Biosystems generó > 10 veces más cDNA que la del competidor en el mismo tiempo.


Para más información puede ponerse en contacto con vitro.marketing@vitro.bio
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Categories: InvestigaciónNumber of views: 1152

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